Uso de la Reacción en Cadena de la Polimerasa para caracterizar aislamientos nativos de Bacillus thuringiens
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Editor
Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria
Resumen
Descripción
En este estudio se estandarizó una metodologlaparala caracterización molecular de cepas nativas de Bacillus thuringiensis,la cual se basó en la amplificación de los genes cry medíantela Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Se utilizaron cuatro mez- clas de oligonucleótidos: dos Generales (I y II),los cuales reconocen genes de las fami- lías cr1n, cryz, cry3, cry4y ryla,y dos Especlficos (A y B), que identifican los genes de lafamilia cryt(crlnAa,cryAb,crytAc,cryrBa,cryCaycrytDa).Lacalidadyconcentra- ción del ADN bacteriano influyó sobre la especificidad y concentración de los produc- tos obtenidos mediante la amplificación de los genes cry. La calidad del ADN purificado a través del método rápido reportado por M.He et al. (Nucleic Ac. Res. 18:166o, r99o) permitió una amplificación eficiente.Para realízar la PCR en condiciones óptimas, se utilizó una mezcla de reacción con un volumen final de zo ¡tL, Ia cual contenía o,4 UM de cada oligonucleótido, rX PCR buffer (so mM KCL, romM Tiis-HCl' pH 8,3 y 3,o mM MgCl2), zoo UM de cada dNTP yrU de Taq-ADN-polimerasa, además de ro-roo y3oo- 5oo ng de ADN bacterial para las mezclas de los oligonucleótidos Generales y Específi- cos, respectivamente. El programa de amplificación incluyó 3o ciclos de desnaturalización a 94oC, hibridación a 53oC y síntesis a 7z"C durante zo segundos cada uno. La metodología estandarizada se puede utilizar rutinariamente para amplificar los genes cry procedentes de aislamientos nativos de B. thuringiensis,lo cual permite clasificarlos y seleccionarlos de una manera rápiday precisa de acuerdo con su activi- dad biológica y potencial biotecnológico; adicionalmente, como paso previo de los ensayos de toxicidad contra diversas especies de insectos plaga de interés agricola.
Palabras clave
Agrociencias