Análise das curvas de dissociação de alta resolução de RT-PCR em tempo real para detectar e diferenciar variantes brasileiras de vírus da videira.
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Detectar e identificar infecções virais em plantas perenes, como videiras, pode ser um desafio. Portanto, o objetivo deste estudo foi realizar uma análise da curva de dissociação de alta resolução (HRM) por RT-PCR em tempo real (RT-qPCR) para detectar e diferenciar variantes do vírus do enrolamento foliar tipo 3 (GLRaV-3) e do vírus do urticado ou nó-curto (GFLV) em 74 e 10 plantas infetadas, respectivamente, mantidas em blocos de coleções de videiras. Uma única curva de amplificação foi gerada para cada amostra por RT-qPCR. Considerando a região amplificada dos genomas dos dois vírus, foi possível identificar diferentes variantes de GLRaV-3 e GFLV, que apresentaram valores de temperatura de dissociação (Tm) significamente diferentes entre si, refletindo diferenças nas sequências de nucleotídeos dos respectivos DNA amplificados e, assim, constituindo uma forma simplificada de diferenciar variantes e avaliar a diversidade viral em acessos de videiras. A análise de HRM foi validada pelo sequenciamento e comparação de nucleotídeos de isolados brasileiros de GLRaV-3 e GFLV.
Palabras clave
GLRaV-3, GFLV, HRM, RT-qPCR, Variantes de sequência, Sequence variants