Metodologia para a determinação da frequência alélica do polimorfismo F200Y, associado à resistência aos benzimidazóis, em pool de larvas de Haemonchus contortus.
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A ovinocultura no Brasil possui importância econômica por aproveitar áreas rurais menores que as necessárias para a agricultura. Entretanto, o principal desafio da produção de ovinos é o controle de parasitas gastrointestinais, como o Haemonchus contortus, que é um nematoide hematófago altamente prolífico parasita de abomaso. O uso intensivo e indiscriminado de anti-helmínticos no tratamento dos animais resulta em resistência, e a resistência anti-helmíntica em H. contortus representa um desafio crescente para o controle da verminose em ovinos, resultando em prejuízos significativos. A genotipagem de polimorfismos, como o F200Y no gene da β-tubulina associado à resistência ao benzimidazol, é uma ferramenta promissora para a detecção precoce da resistência, e o uso de amostras em pool permite otimizar custos e tempo de processamento. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia rápida e eficiente de genotipagem de pool de larvas de H. contortus, em substituição a larvas individuais, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Para tanto, foram avaliadas as técnicas de high-resolution melting e discriminação alélica com sondas de hidrólise marcadas com FAM e HEX. DNA sintético e larvas individuais, contendo diferentes proporções do alelo de resistência (0 a 100% R), foram usados como curvas padrão, e os dados de fluorescência foram analisados por três métodos (curva sigmoide, ΔCt e log). A discriminação alélica com sondas de hidrólise em qPCR seguida da análise de fluorescência por log(FAM/HEX) promoveu maior precisão na estimativa da frequência do alelo de resistência em amostras em pool, com variação de discordância entre 2,8% e 5,0% em relação à genotipagem de larvas individuais. A validação dessa técnica de genotipagem em pool de larvas de H. contortus permitirá seu uso para o monitoramento da resistência anti-helmíntica a campo, auxiliando no direcionamento estratégico do controle da verminose em rebanhos ovinos.
Financiamento: FAPESP (2021/02535-5), CNPq | PIBIC (100763/2025-1).
Financiamento: FAPESP (2021/02535-5), CNPq | PIBIC (100763/2025-1).
Palabras clave
Metodologia, F200Y, Ovino, Resistência, Verminose, Polimorfismo, Benzimidazol, Larva, Haemonchus Contortus, Ovinocultura