Clonagem, purificação e avaliação da proteína PLDr de Corynebacterium pseudotuberculosis como marcador de infecção de ovinos e caprinos.
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A linfadenite caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa crônica, de ocorrência cosmopolita, sendo caracterizada pela formação de abscessos nos linfonodos superficiais, internos e nas vísceras. Macroscopicamente os animais apresentam linfonodos com volumes aumentados, onde uma espessa camada de tecido conectivo envolve o material purulento pastoso ou seco, com uma coloração amarelo esverdeado. A LC é causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, que acomete principalmente caprinos e ovinos. Esta patogenia causa debilitação progressiva do animal, promovendo o emagrecimento, comprometimento da pele e lã, diminuição na produção de leite e condenação da carne, resultando em uma grande perda econômica. A alta virulência desta bactéria e sua persistência no organismo do animal, deve-se principalmente à ação da exotoxina fosfolipase D (PLD), que é uma proteína codificada a partir do gene pld. Atualmente estão disponíveis no mercado testes para diagnósticos baseados em testes sorológicos, mas que ainda apresentam pouca eficiência. Devido ao crescimento da ovinocapriocultura no Brasil e diante da importância da LC, busca-se cada vez mais o desenvolvimento de testes de diagnósticos mais precisos, rápidos, com praticidade e baixo custo para utilização a campo que possam favorecer o produtor. Este trabalho teve como objetivos a clonagem do gene pld pela plataforma Gateway (Invitrogen ®), expressar o gene e avaliar o potencial uso da PLDr como marcador de infecção por C. pseudotuberculosis por meio de testes sorológicos. Como resultados, a proteína PLDr foi obtida com 31KDa, onde na purificação não foram observados contaminantes. Por meio do teste sorológico Western blotting foi possível identificar animais infectados por C. pseudotuberculosis. Portanto a proteína PLDr mostra-se antigênica frente aos soros de animais naturalmente infectados e pode ser sugerida como um bom marcador para testes diagnósticos para a linfadenite caseosa.
Palabras clave
Diagnostico, Linfadenite Caseosa, Doença Animal, Ovino, Caprino