Desenvolvimento de metodologia de cultivo de hepatócitos bovinos in vitro para estudos moleculares e bioquímicos.
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O fígado é responsável pela regulação do metabolismo animal e produção de proteínas do sistema imune, sendo o estudo de suas vias essencial para o entedimento de processos como sinalização intracelular e análise de rotas metabólicas. Para tal, foi desenvolvida uma metodologia de isolamento e cultivo primário de hepatócitos bovinos in vitro. Hepatócitos foram isolados de fígado bovino pelo método enzimático sem perfusão com colagenase tipo II. O método de exclusão por Azul de Trypan foi usado para determinar o rendimento total de células e a taxa de sobrevivência dos hepatócitos cultivados na ausência de matriz, em placas recobertas com colágeno ou gelatina. RNA foi extraído das células isoladas, quantificado com Nanodrop e a qualidade foi analisada através do Bioanalyzer. Os resultados apontaram um rendimento de cerca de 1,7x106 células viáveis/g de fígado onde hepatócitos bovinos apresentaram maior integridade morfológica quando cultivados em monocamada de gelatina , com uma média de viabilidade de 52,5%. A quantidade e integridade do RNA também foram superiores nesta configuração de matriz. O estabelecimento de um protocolo de cultivo de hepatócitos bovinos será uma ferramenta útil para estudos de metabolização de drogas, imunomodulação e sinalização intracelular impactando sobre a agilidade em testes e obtenção de novos fármacos para o campo veterinário.
Palabras clave
Cultivo celular, Hepatócito, Isolamento celular