Efeitos da substituição do soro fetal bovino (SFB) e da albumina sérica bovina (BSA) pela ovalbumina (OVA) na produção in vitro de embriões bovinos.
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As biotecnologias aplicadas à reprodução animal vêm causando grandes impactos à produção animal, principalmente nas últimas duas décadas. Historicamente, o meio de cultivo contém SFB ou BSA, que são preparados e purificados a partir de produtos derivados sangUíneos e apresentam altos riscos de contaminação por patógenos, como vírus: BHV-I e BVDV (GUERIN et ai., Buli Academic Veterinarian France, v.61, po513-520, 1988), e prions: BSE (KRISHER et ai., Biology of Reproduction, v.60, p.1345-1352, 1999). De acordo com Barlian et ai. (Cell Biology Intemational, v.17, p.677-684, 1993), a OVA é um suplemento protéico não aparentado ao BSA, mas que -possui a capacidade de manter a proliferação celular. Além disso, por ser de origem heteróloga, os riscos de transmissão de doenças são menores. O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos da substituição do SFB e do BSA pela OVA na PIV. Os oócitos foram maturados in vitro (MlV) em meio TCM 199 com sais de Earle, suplementado de acordo com os tratamentos: SFB (10% SFB; Crypion«», BSA (Inlab«>; 4mgimL BSA), OVA (Inlab«>; 4mg/mLOVA), e 1,0~gimL de FSH (Pluset>C, alier), 50ug/mL de hCG (Profasi«>,S erono), 1,0ug/mL de estradiol (Sigma E-2758), 0,2mM de piruvato de sódio e 83,4ugimL de amicacina, durante 24h à 38,5°C e atmosfera de 5% de CO2 em aro A fecundação in vitro (FIV) foi realizada após 24h de MIV, em meio TALP-FIV, com 0,2mM de piruvato, 83,4ugimL de amicacina e suplementado de acordo com os tratamentos: 6mgimL de BSA ou 6mgimL de OVAo Após o ténnino da incubação com os espennatozóides, os prováveis zigotos foram submetidos ao cultivo em meio SOF e suplementado de acordo com os tratamentos (SFB, BSA ou OVA), atmosfera com baixa tensão de O2 (5% de O" 5% de CO2 e 90% de NJ, umidade saturada, em câmara modular e mantida em incubadora de cultivo à 38,5C1Cd, urante 7 a 8 dias, para atingirem o estádio de blastocisto. Os tratamentos foram nomeados da seguinte maneira: a primeira letra referente à etapa de maturação, a segunda à fecundação, e a terceira ao cultivo. Para avaliação quantitativa, foram utilizados 2355 oócitos bovinos distribuídos entre sete grupos experimentais: CONT, SBS, SOS, BBB, BOB, 000 ou OBO, em cinco repetições. No total dos oócitos avaliados, 1795 (76,22%) clivaram, 646 (27,43% do total de oócitos) tomaram-se blastQcistos e 243 (10,32% do total de oócitos, ou 37,62% do total de blastocistos) eclodiram. A etapa de CIV pennitiu avaliar que os diferentes tratamentos foram semelhantes (p>0,05) quanto à taxa de clivagem. Entretanto, quanto à taxa de produção de blastocistos, o grupo 000 (26,0%) foi semelhante (p>0,05) aos grupos SOS (33,8%), BBB (35,8%), BOB (32%) e OBO (33%), mas foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (45%) e SBS (42,8%). Quanto à taxa de eclosão, o grupo 000 (20,4%), foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (46,2%), SBS (43,4%), SOS (38,4%), BBB (41,6%), e semelhante aos grupos BOB (28,2%) e OBO (25,4%). Apesar da redução na quantidade blastocistos produzidos, concluímos que é possível produzir in vitro embriões bovinos na ausência de SFB e/ou BSA.
Palabras clave
Soro fetal bovino (SFB), Albumina sérica bovina (BSA), Ovalbumina (OVA), Produção in vitro, Embriões bovinos