Cultura de protoplastos e expressão transiente de gfp mediada por eletroporação em bananeira.
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Descripción
A tecnologia de protoplasto é um adjunto importante para o melhoramento genético de plantas, particularmente para as plantas cujos métodos convencionais de hibridação sexual são limitados por causa de esterilidade sexual e/ou longo período de juvenilidade. Protoplastos isolados tem capacidade de incorporar materiais exógenos, tais como DNAs, por eletroporação. Um sistema de obtenção de plantas a partir de protoplastos de bananeira foi desenvolvido, e eletroporação de protoplastos foi realizada verificando expressão transiente do gene repórter gfp (green fluorescent protein). Protoplastos de bananeira da variedade diplóide, “Embrapa/CNPMF2803-01” (Musa acuminata, AA), foram isolados de células embriogênicas em suspensão utilizando uma solução enzimática de 1,5% de Celulase Onozuka RS e 0,2% de Pectoliase Y23 em 0,6M de D-manitol, e foram cultivados por uma técnica de cultura protetora com células de bananeira ou de braquiária. Brotos de bananeira foram obtidos por embriogênese somática de microcalos regenerados. Eletroporação de protoplastos foi realizada usando plasmídeo pMNG1001 que contem o gene gfp. A expressão transiente do gene foi observada quando protoplastos foram eletroporados com o plasmídeo numa solução tampão para eletroporação, por 3 pulsos elétricos de 1250 V/cm por 50 μs de cada. O sistema desenvolvido pode ser útil para o melhoramento de bananeira por meio de transformação genética.
Palabras clave
Transformação, Embriogênese, Plasmídeo, Musa Acuminata